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生物墨水肝组织模型试剂盒B的使用

 发布时间:2021-10-15 点击量:156
  说明
 
  肝组织模型试剂盒提供了用于包封肝细胞和/或星状细胞的*佳生物墨水,然后进一步利用所提供的抗体通过免疫荧光或免疫组织化学进行功能分析。
 
  包包含:
 
  · GelXA LAMININK 111 Bioink-3 mL
 
  · Ⅰ型胶原抗体*-100µL
 
  · ABCC2抗体*-100µL
 
  · CYP3A43抗体*-100µL
 
  *宿主:兔,已验证物种反应性:人
 
  储存
 
  生物墨水应该储存在摄氏4到8度之间。生物墨水的保质期是两个月。包装上注明了有效期。在储存之前,确保墨盒盖上盖子,以防干燥。保持生物墨水不冻-将生物墨水放入冷冻室有可能损害其印刷适性。如果从紫外线防护墨盒转印,请保持生物墨水不受光影响, 以避免在印刷前交联。在黑暗模式下使用3D生物打印机。光引发剂对反复或长时间暴露于热敏感。
 
  抗体到达后应保存在-20°C。当储存在-20°C时,抗体的作用至少为12个月。注意,抗体是非常稳定的,当适当储存时,可以使用更长的时间。抗体在-20°C保存前不需要等分。由于抗体是在甘油中提供的,它们在推荐的储存温度下不会冻结,因此不会暴露于冷冻/解冻循环中。
 
  与细胞混合
 
  建议将GelXA LAMININK 111预热至37°C,然后再与细胞混合。我们建议将生物墨水与细胞混合之前将 GelXA LAMININK 111 加热至 37°C。 我们建议将 bioink与高浓度细胞混合。您可以手动混合细胞,也可以使用我们革命性的 CELLMIXER 进行更大数量的混合。CELLMIXER 旨在简化胞混合过程,并使细胞活力增加的均匀悬浮液成为可能。有关更多详细信息,请参阅与细胞混合方案GelXA 系列。
 
  生物打印组织模型
 
  肝组织模型可以通过在所需生物墨水(GelXA  LAMININK  111)中逐层生物打印肝细胞和
 
  /或星状细胞来生成。如果用原代细胞进行生物打印,有限的细胞数目将限制构建体的大小。因此,10-50µL的结构、液滴或圆盘足以用于药物筛选目的。还可以生成更大的构造,特别是当需要单元格分层时。访问我们的网站下载生物打印肝组织模型的示例代码。
 
  交联
 
  GelXA层状油墨111生物打印构建物的交联用BIO X上的光固化模块和/或用含CaCl2的交联溶液进行。如果同时使用两种交联方法,则从光固化开始。在光固化之前,建议将印版温度降低到15°C。将印版放置在冰面上,使GelXA层印墨111短暂凝固。在交联剂中30秒至5 分钟温育时间对于大多数结构是足够的。孵育后,除去交联液,用含钙和镁的Hank's平衡盐溶液(HBSS+/+)或基础细胞培养基洗涤并加入所需的细胞培养基。
 
  组织学分析
 
  要获得生物打印结构的 5-8 µm 部分,请参阅CELLINK 网站上支持部分下的固定、嵌入和切片协议GelXA 系列。 然后按照免疫荧光染色协议GelXA 系列用抗体染色组织模型。 I型胶原蛋白、ABCC2 和CYP3A43抗体的稀释度如下:
 
GelXA Bioink描述
 
  基于GelXA的生物油墨提供了GelMA的生物特性,在更宽的温度范围(如室温)下具有印刷适性。GelXA生物油墨具有双重离子和光诱导交联能力,以更好地调节细胞敏感性,并允许调节构建体的机械特性,使其具 有更多的组织特异性。GelXA bioink系列在明视场和荧光观察中提供最小的光学干扰,用于无损分析。在组织化学分析中,GelXA也将具胞和细有最小的背景效应,允许集中研究细胞-细胞-基质的相互作用。
 
抗体描述
 
  肝组织模型的直接功能分析可以通过免疫荧光或免疫组化的组织学分析进行。肝组织模型试剂盒中包含的抗体用于肝细胞和星状细胞在生物打印构建体中的单一或共培养。I型胶原抗体是用来评估在纤维化诱导过程中星状细胞产生I型胶原的情况。ABCC2抗体用于评价肝细胞中转运体多药耐药蛋白2(MRP2),CYP3A43抗体用于分析细胞色素P450中负责药物代谢的一种酶。
 
  肝抗体数据
 
  用包括初级抗体I型胶原、ABCC2和CYP3A43的免疫荧光分析的内部数据证明了对不同肝细胞类型和来源的优化使用。
 
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  图1.实施例在用LX2和HepG2共培养7天的3D生物打印的GelXA层连接111中I型胶原的表达。合并图像I型胶原表达(1:50稀释度),绿色,细胞核用DAPI(1:50稀释度)染色, 蓝色。二抗:Alexa Fluor 488。放大倍数:10倍,刻度线:100µm。
 
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  图 2. ABCC2 在 3D 生物打印 3D 生物打印 GelXA LAMININK 111 中的 ABCC2 表达示例,该 GelXA LAMININK 111 在共培养 7 天时装载 LX2 和 HepG2。 ABCC2 (MRP2)抗体可用于染色肝细胞 HepG2 细胞系和原代肝细胞。 ABCC2 表达(1:200 稀释)、绿色和用 DAPI(1:50 稀释)染色的细胞核、蓝色的合并图像。 二抗:Alexa Fluor 488。放大倍数:10X,比例尺:100 µm。
 
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  图3.作为肝组织模型的3D生物打印的原代肝细胞中CYP3A43表达的实例。CYP3A43抗体可用于原代肝细胞的团簇和单细胞染色。合并图像CYP3A43表达(1:10 00稀释度),绿色, 细胞核DAPI(1:50稀释度)染色,蓝色。二抗:Alexa Fluor 488。放大倍数:10倍,刻度线:100µm。